概覽:

 

Calbiochem所建議的冷凍切片單株和多株抗體可以在冷凍組織切片中用來定位抗原。

 

必要的溶液和試劑:

 

組織切片: 恒低溫(cryostat)冷凍切片(4到8微米厚)

膠底溶液(subbing solution): 將0.3% (w/v)明膠和0.05%硫酸鉻鉀溶于蒸餾水中(若有使用未經涂佈的載玻片)

步驟: 冷凍切片的制備方法

 

使用95%乙醇清理載玻片, 以膠底溶液處理 (或者使用涂佈載玻片), 然后風亁。

從組織塊上切下4到8微米厚的冷凍切片(frozen in isopentane precooled in liquid nitrogen, embedded in OCT compound in cryomolds, and stored at -70°C)。

讓冷凍切片回到室溫(30分鐘)。

在冷丙酮中將載玻片固定10分鐘然后保持冷藏狀態(或者選擇另一種固定步驟)。

在PBS中潤洗并且更新溶液三次。

使用含有0.1%過氧化氫(H2O2)的PBS溶液孵育5到10分鐘以減緩內生過氧化氫酶活性。

在PBS中潤洗。

免疫過氧化酶染色法