本文標題："沉淀物凝膠的孔徑微觀計量圖像顯微鏡技術"
發布者：yiyi ------ 分類: 行業動態 ------
人瀏覽過-----時間：2018-3-27 17:28:32
沉淀物凝膠的孔徑微觀計量圖像顯微鏡技術
凝膠的孔徑范圍和分子篩性質可以簡單地通過控制單體和交聯劑的
濃度而得到。比如在7．5％膠濃度(單體和二聚體的總和)中，單體與交
聯劑濃度之比為95：5時，將得到5nm大小孔徑。而在相同比例下，膠濃
度為30％時，孔徑為2nm。如果控制單體與二聚體的比例，甚至還可以
控制用于蛋白質分離的特定孔徑。
由于在設計聚丙烯酰胺介質特性時具有很好的靈活性，使得這種介
質電泳成為分析蛋白質的非常有力的工具。與色譜技術不同的是電泳中
的凝膠不呈粒狀，而是一種取決：尸模子(平板或柱狀)形狀的連續體系
。實際上凝膠聚合物分子呈網狀結構，由緩沖液包圍著，并且網狀結構
框架中的一些“孔”亦由緩沖液填充。當在兩極間外加電壓時，蛋白質
分子與緩沖液中的陰陽離子分別向合適的電極移動。在移動過程中有摩
擦存在，摩擦力的大小與凝膠孔徑大小及帶電粒子的半徑相關，這意味
著除了凈電荷及質量影響外，分子篩效應也影響蛋白質的分離效果。
一旦蛋白質顯著分離，凝膠即從系統中取出，這時有必要采用高氯
酸或三氯醋酸將蛋白質沉淀來固定蛋白(Mackie，1980，1990；Laird等
，1982)。然后，采用合適的染料對膠進行染色以使這些被固定的蛋白
能被觀察到(通常染色劑采用溶于乙醇、乙酸和水混合溶劑中的考馬斯
亮藍，上述溶劑比例是25：8：67)。染色結束后，采用同樣溶劑洗滌凝
膠，將未被結合的染料洗去，使蛋白呈現藍色帶狀(如在清水背景下可
呈現蛋白質分離輪廓)。所有采用凝膠作為支持介質的電泳體系都需要
固定和染色步驟，因為能滿足電泳要求的蛋白質必須是水溶性的并且能
很好地被固定和觀察，因此它們必須首先采用沉淀法從溶液中分離出來
，然后采用合適的染色步驟以便被觀察到(Rehbein等，1995)，隨后對
膠的檢查可以目測或采用光密度計或圖像分析儀測量蛋白質在分離圖譜
中的位置及濃度。
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